Nouveau rôle du protéasome dans l’assemblage des complexes d’activation de NF-kappaB : applicat[...]

Centre d'Immunologie et des Maladies Infectieuses / UPMC / INSERM; Paris; Sur place; EUR 20 000 - 40 000; Plein temps

Résumé du poste

Un laboratoire de recherche biomedical à Paris recherche un stagiaire en biologie cellulaire et moléculaire pour un projet sur le myélome multiple. Le candidat travaillera sur des techniques avancées, incluant CRISPR et cytométrie, tout en étudiant les mécanismes de résistance aux traitements. Ce stage est destiné aux étudiants motivés souhaitant poursuivre une thèse, avec diverses options de financement après le stage.

Qualifications

• Motivé par effectuer une thèse avec financement post-stage.
• Connaissance en culture de cellules primaires cancéreuses.
• Compétence en génération de cellules knockout et knockin.

Responsabilités

• Intégrer le projet de recherche et mettre en œuvre diverses techniques.
• Tester des composés inhibiteurs sur des lignées cellulaires humaines.
• Manipuler l’expression de régulateurs de la voie NF-kappaB.

Connaissances

Biologie cellulaire et moléculaire

Techniques d'imagerie

Cytométrie

Formation

Études en Biologie Cellulaire et Moléculaire

Outils

CRISPR / Cas9

Western Blot

Microscopie

Description du poste

Description

Le myélome multiple (MM) est une hémopathie incurable dont les rechutes et les résistances aux traitements sont fréquentes. Cette maladie se caractérise par une prolifération anormale de plasmocytes dans la moelle osseuse, entraînant lésions osseuses, insuffisance rénale, anémie, hypercalcémie et infections récurrentes. Le diagnostic repose généralement sur la détection d'une immunoglobuline monoclonale et d'un taux élevé de plasmocytes tumoraux dans la moelle osseuse. En France, 5 nouveaux cas de MM sont diagnostiqués chaque année. L'inhibiteur du protéasome bortézomib (BTZ) a considérablement amélioré le pronostic des patients, mais ses effets secondaires et sa perte d’efficacité anti-tumorale rendent nécessaire la recherche d’alternatives thérapeutiques. L’effet anti-tumoral des inhibiteurs du protéasome vient en grande partie du fait qu’ils inhibent la voie de signalisation NF-kappaB qui est fortement activée dans les cellules cancéreuses et qui participe à leur survie.

Nous avons découvert un nouveau mécanisme de régulation de la voie NF-kappaB faisant intervenir des effecteurs du protéasome. En effet, nous avons observé que le traitement de cellules tumorales avec certaines cytokines induisait la formation de complexes d’activation de NF-kappaB et découvert par un criblage de siRNAs, que le système ubiquitine-protéasome jouait un rôle important dans la formation de ces complexes. Par ailleurs, un deuxième criblage avec une banque de médicaments (molécules approuvées par la FDA) nous a permis d’identifier des composés qui empêchent la formation des complexes et l’activation de la voie NF-kappaB. L’objectif de ce projet sera de comprendre, en s’appuyant sur nos résultats de criblage, comment les inhibiteurs du protéasome inhibent la formation des complexes d’activation de NF-kappaB et d’identifier des cibles thérapeutiques capables de contourner les mécanismes de résistance au BTZ dans le MM. Cette étude qui visera à tester des composés inhibiteurs de NF-kappaB et à manipuler l’expression de nouveaux régulateurs de cette voie de signalisation se fera sur des lignées cellulaires humaines de MM, sensibles ou résistantes aux inhibiteurs du protéasome, ainsi que sur des plasmocytes médullaires de patients nouvellement diagnostiqués avec un myélome multiple ou en rechute.

Le projet de stage s’intégrera dans ce projet de recherche et mettra en œuvre des techniques de biologie cellulaire et moléculaire, associées à des approches d’imagerie et de cytométrie.

Profile

Études en Biologie Cellulaire et Moléculaire. Orientation Cancérologie et Immunologie.

Motivé par effectuer une thèse (différentes sources de financement possibles, post-stage)

Techniques mises en œuvre (non exhaustif) :

• Biologie cellulaire et moléculaire : culture de lignées de cellules, cellules primaires cancéreuses (moelle osseuse), traitement de cellules, génération de cellules knockout et knockin par l'approche CRISPR / Cas9, transfection (ADN et siRNA), immunofluorescence, clonage d'ADN, tests de viabilité cellulaire
• Biochimie : Western Blot, Immunoprécipitation, essais enzymatiques
• Imagerie : immunofluorescence, microscopie classique et confocale, microscopie en temps réel
• Cytométrie : marquages extracellulaires et intracellulaires, tri cellulaire

Starting date

• 01-01